PstI - PstI

Тынық мұхитындағы Оңтүстік Америка стандартты уақытыМен II тип болып табылады шектеу эндонуклеаза грам теріс түрлерінен оқшауланған, Providencia stuartii.

Функция

Тынық мұхитындағы Оңтүстік Америка стандартты уақытыМен бөлінемін ДНҚ тану кезегінде 5′-CTGCA / G-3 ′ генерациялайтын фрагменттері 3′-когезиялық терминимен.[1] Бұл бөліну өнімін береді жабысқақ ұштар 4 базалық жұп. PstI димер ретінде каталитикалық тұрғыдан белсенді. Екі суббірлік екі еселенген симметрия осімен байланысты, бұл субстратпен комплексте диад осімен сәйкес келеді. тану реттілігі. Оның молекулалық массасы 69 500 құрайды, құрамында 54 оң және 41 теріс зарядталған қалдықтар бар.[2]

Тану реттілігіСайтты кесу
 5'CTGCAG 3 '3'GACGTC 5'
 5 '- CTGCA G - 3' 3 '- G ACGTC — 5'

ПстИ шектеу / өзгерту (R / M) жүйесі екі компоненттен тұрады: бөгде ДНҚ-ны бөлетін рестриктивті фермент және а метилтрансфераза арқылы жергілікті ДНҚ тізбегін қорғайды гистонды метилдеу. Екеуінің тіркесімі вирусқа қарсы қорғаныс механизмін ұсынады.[3] Метилтрансфераза және эндонуклеаза екі бөлек ақуыз ретінде кодталады және тәуелсіз әрекет етеді. PstI жүйесінде гендер бір-біріне қарама-қарсы тізбектерде кодталған және сондықтан болуы керек транскрипцияланған бөлек-бөлек промоутерлер. Транскрипцияны бастауға арналған орындар тек 70-пен бөлінген негізгі жұптар.[4] Метилазаға қатысты эндонуклеазаның экспрессиясының кешігуі екі ақуызға тән айырмашылықтарға байланысты.[5] Эндонуклеаза - димер, оны құрастыру үшін екінші саты қажет, ал метилаза - мономер.

PstI функционалды түрде BsuBI-ге тең. Екі ферменттер де 5'CTGCAG мақсатты реттілігін таниды. Ферменттік жүйелерде ұқсас метилтрансферазалар бар (41% амин қышқылының идентификациясы), рестрикциялық эндонуклеазалар (46% аминқышқылдардың идентификациясы) және генетикалық құрам (58% нуклеотидтердің идентификациясы).[6] Бұл бақылаулар ортақ болуды ұсынады эволюциялық Тарих.

ДНҚ-ның преференциалды қос тізбекті бөлуін зерттегенде, рестрикциялық эндонуклеаза PstI pSM1 плазмидті ДНҚ-мен байланысады.[7]

ДНҚ-ны клондау

PstI - ДНҚ-ны клондау үшін пайдалы фермент, өйткені ол гибридті ДНҚ молекулаларын генерациялау үшін селективті жүйені ұсынады.[8] Бұл гибридті ДНҚ молекулаларын қалпына келтірілген PstI учаскелерінде бөлуге болады. Оның қолданылуы тек молекулалық клондауымен шектелмейді; ол сонымен қатар шектеу учаскесін картаға түсіруде, генотипте, оңтүстік блоттауда, шектеу фрагментінің полиморфизмінде (RFLP) және SNP қолданылады.[9] Бұл сондай-ақ изошизомер бастап SalPI ферменті Streptomyces albus P.[10]

Бөлу

PstI субстраттың аса сыпайылығының әсерінсіз тазартылған pSM1 ДНҚ-ны жақсырақ бөліп алады.[11] Алайда, бұл үзілудің әсері тану орнына байланған кезде немесе ДНҚ сцисиясында пайда бола ма, жоқ па белгісіз. Оның әр түрлі шектеу учаскелеріндегі дифференциалды бөліну жылдамдығы дуплексті құрылымның бес ерекшелігіне байланысты. Сызықтық ДНҚ молекуласындағы ұштарға жақындығы, ферменттерді тану учаскелері ішіндегі ДНҚ реттілігінің өзгеруі, ерекше ДНҚ тізбектері аймақтары мен тану учаскелері арасындағы қысқа қашықтық және ақыр соңында ілмектер мен шаш қыстырғыштары сияқты құрылымдар. Осы бес фактордың жиынтық әсері рестрикментті ферменттердің оны тану орындарына қол жетімділігіне әсер етуі мүмкін.

Қатынас

Әдебиеттер тізімі

  1. ^ «PstI (10 U / L) - Thermo Fisher Scientific». www.thermofisher.com. Алынған 2016-04-29.
  2. ^ Уолдер, Р.Ю .; Вальдер, Дж. А .; Donelson, J. E. (1984-06-25). «PstI шектеу-модификациялау жүйесінің толық нуклеотидтік реттілігі және ұйымдастырылуы». Биологиялық химия журналы. 259 (12): 8015–8026. ISSN  0021-9258. PMID  6330092.
  3. ^ Уолдер, Р.Ю .; Хартли, Дж. Л .; Донелсон, Дж. Э .; Валдер, Дж. А. (1981-03-01). «Escherichia coli ішіндегі Pst I шектеу-модификация жүйесін клондау және экспрессиясы». Америка Құрама Штаттарының Ұлттық Ғылым Академиясының еңбектері. 78 (3): 1503–1507. Бибкод:1981PNAS ... 78.1503W. дои:10.1073 / pnas.78.3.1503. ISSN  0027-8424. PMC  319159. PMID  6262807.
  4. ^ Уолдер, Р.Ю .; Вальдер, Дж. А .; Donelson, J. E. (1984-06-25). «PstI шектеу-модификациялау жүйесінің толық нуклеотидтік реттілігі және ұйымдастырылуы». Биологиялық химия журналы. 259 (12): 8015–8026. ISSN  0021-9258. PMID  6330092.
  5. ^ Уолдер, Р.Ю .; Вальдер, Дж. А .; Donelson, J. E. (1984-06-25). «PstI шектеу-модификациялау жүйесінің толық нуклеотидтік реттілігі және ұйымдастырылуы». Биологиялық химия журналы. 259 (12): 8015–8026. ISSN  0021-9258. PMID  6330092.
  6. ^ Xu, G L; Капфер, В; Уолтер, Дж; Trautner, T A (1992-12-25). «BsuBI - PstI изоспецификалық шектеу және модификация жүйесі: BsuBI гендері мен ферменттерінің сипаттамасы». Нуклеин қышқылдарын зерттеу. 20 (24): 6517–6523. дои:10.1093 / нар / 20.24.6517. ISSN  0305-1048. PMC  334566. PMID  1480472.
  7. ^ Армстронг, Карен (1982). «PstI эндонуклеазасын шектеу арқылы сайтқа тәуелді бөлу». Нуклеин қышқылдарын зерттеу. 10 (3): 993–1007. дои:10.1093 / нар / 10.3.993. PMC  326216. PMID  6278444.
  8. ^ Боливар, F; Родригес, RL; Грин, ПиДж; Betlach, MC; Хейнекер, HL; Бойер, HW; Crosa, JH; Falkow, S (1977). «Жаңа клондау машиналарының құрылысы және сипаттамасы. II. Көп мақсатты клондау жүйесі». Джин. 2 (2): 95–113. дои:10.1016/0378-1119(77)90000-2. PMID  344137.
  9. ^ «PstI».
  10. ^ Картер, Жаклин (1980). «SalPI және PstI шектеу ферменттері арқылы ДНҚ-ның бөлінуін салыстыру». Нуклеин қышқылдарын зерттеу. 8 (21): 4943–54. дои:10.1093 / nar / 8.21.4943. PMC  324271. PMID  6255438.
  11. ^ Томас, М (1975). «EcoRI Restriction эндонуклеазасы бар бактериофагтық лямбда ДНҚ-сының бөлінуіне зерттеулер». Молекулалық биология журналы. 91 (3): 315–328. дои:10.1016/0022-2836(75)90383-6. PMID  1102702.