Кірістірілген полимеразды тізбекті реакция - Nested polymerase chain reaction

Кірістірілген ПТР әдісін бейнелейтін диаграмма.

Кірістірілген полимеразды тізбекті реакция (Кірістірілген ПТР) модификациясы болып табылады полимеразды тізбекті реакция күтпеген праймер байланыстыру алаңдарының күшеюіне байланысты өнімдердегі спецификалық емес байланыстыруды азайтуға арналған.[1]

Полимеразды тізбекті реакция

Полимеразды тізбекті реакция өзі күшейту үшін қолданылатын процесс ДНҚ үлгілер, температура арқылы ДНҚ-полимераза. Өнімдерді пайдалануға болады реттілік немесе талдау, және бұл процесс көпшіліктің негізгі бөлігі болып табылады генетика зерттеу зертханалары, қолдануымен бірге ДНҚ саусақ іздері үшін сот-медициналық сараптама және адамның басқа генетикалық жағдайлары. Кәдімгі ПТР қажет праймерлер мақсатты ДНҚ термининдеріне қосымша. ПТР-ден алынатын өнім мөлшері реакцияға ұшыраған температуралық циклдар санына байланысты артады. Әдетте пайда болатын проблема - күтпеген өнім беретін ДНҚ-ның дұрыс емес аймақтарымен байланыстыратын праймерлер. Бұл проблема ПТР циклдарының көбеюіне байланысты болады.

Праймерлер

Кірістірілген полимеразды тізбекті реакция полимеразды тізбекті реакцияның екі қатарлы жүрісінде қолданылатын екі праймер жиынтығын қамтиды, екінші жиынтық бірінші айналым өніміндегі екінші мақсатты күшейтуге арналған. Бұл бірінші раундтағы аз мөлшерде күшейтуге мүмкіндік береді, бұл арнайы емес өнімдерді шектейді. Екінші кірістірілген праймер жиынтығы тек мақсатты өнімді күшейтудің бірінші айналымынан күшейтуі керек, ал арнайы емес өнім. Бұл арнайы емес өнімдерді азайту кезінде жалпы циклдарды көбірек өткізуге мүмкіндік береді. Бұл сирек шаблондарға немесе жоғары фоны бар ПТР үшін пайдалы.

Процестер

Мақсатты ДНҚ жасыл түсте көрсетілген бірінші праймер жиынтығымен полимеразды тізбекті реакцияның алғашқы жүрісіне өтеді. Альтернативті және ұқсас праймерлік байланыстыру орындарын таңдау өнімдердің таңдауын ұсынады, тек мақсатты реттілік бар.

Бірінші реакциядан шыққан өнім қызыл түспен көрсетілген екінші праймер жиынтығымен екінші жүгіріске ұшырайды. Кез-келген қалаусыз ПТР өнімдерінің екеуінде де жаңа праймерлердің байланыстыратын орындары болуы екіталай, бұл екінші ПТР-ден алынған өнімнің праймер димерлерінің, шаш түйрегіштерінің және альтернативті праймерлік мақсатты реттіліктің қалаусыз өнімдерінен аз ластануын қамтамасыз етеді.

Әдебиеттер тізімі

  1. ^ Элизабет ван Пельт-Веркуил; Алекс ван Белкум; Джон П. Хейс (2008 ж. 14 наурыз). ПТР күшейтудің принциптері мен техникалық аспектілері. Springer Science & Business Media. 190 - бет. ISBN  978-1-4020-6241-4.